Quel type de configuration de caméra est nécessaire pour prendre des photos de luciférase?


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Je travaille avec de la luciférase qui a une longueur d'onde bleue de 480 nm et je veux pouvoir la prendre en photo. Le problème est que je peux voir la luciférase briller dans toute sa splendeur devant moi, mais peu importe mes efforts, je ne peux pas prendre une photo de la luciférase avec mon reflex numérique (Nikon D80) à l'aide d'un objectif Nikon 50 mm et un objectif Nikon 35 mm. J'ai essayé de retirer les filtres (Nikon L37 et Hoya UV).

Je suis curieux de savoir s'il me manque un certain objectif / filtre ou si je devrais prendre des photos avec une configuration d'éclairage différente. J'expose déjà pendant 30 "à f / 22 sur ISO 1600. Peut-être plus longtemps?


Quelle est votre configuration d'éclairage?
MikeW

Je suppose que des temps d'exposition beaucoup plus longs sont nécessaires (. Et dans l'obscurité absolue Identique à photographier des étoiles la nuit par exemple. Je suppose un EV -5 / -6, donc vous avez besoin de beaucoup plus d'arrêts pour corriger cela. Réglez donc l'ISO à 400 par exemple et commencer à 1 minute d' exposition à un Diafragma F / 4.0. Quelque chose de visible? Diminuer le temps de 1 arrêt, rien de visible? Augmenter à 800 iso, et ainsi de suite, jouer avec l'ISO et le temps pour maintenir la qualité.
Caspar Kleijne

Dans une pièce sombre. Comment la luminosité se compare-t-elle aux index lumineux sur un cadran de montre-bracelet? Voir mon image ci-dessous. Je soupçonne que votre luciférase devrait être plus brillante que cela.
Russell McMahon

La luciférase sera en fait plus terne qu'une montre-bracelet (selon les concentrations). J'utilise une pièce complètement sombre.
bobthejoe

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Non, pas un idiot, tu étais assez intelligent pour nous trouver de l'aide lol! Heureux que ça marche maintenant.
MikeW

Réponses:


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Cette longueur d'onde est certainement dans le spectre que vous pouvez capturer avec n'importe quel objectif, avec ou sans filtres. Les capteurs numériques capturent entre 350 et 1000 nm S'il brille , alors vous voudriez que ce soit votre principale source de lumière. Toute lumière supplémentaire que vous jetez dessus diluera la lueur de votre sujet et la rendra plus difficile à voir.

Quelle ouverture utilisez-vous? À moins que ce soit incroyablement sombre, je ne peux pas imaginer 30 "ne capturer quelque chose que si vous utilisez une très petite ouverture.

Faites-vous cela dans une pièce sombre avec un fond sombre? Que voyez-vous dans vos expositions de 30 "?

Par essais et erreurs, vous pouvez faire une gamme de vitesses d'obturation (et ISO) pour essayer de vous concentrer sur une bonne valeur d'exposition. Si vous pouvez le voir avec vos yeux, vous devriez pouvoir le photographier sans équipement spécial.


J'utilise f22, ISO 1600. Me confond aussi.
bobthejoe

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Oh mon Dieu, f / 22 - c'est votre problème. f / 22 avec 30 secondes ne va certainement pas l'obtenir. Ouvrez aussi large ( nombres f inférieurs ) que possible - au moins pour commencer. f / 22 signifie essentiellement qu'il y a une taille de trou d'épingle de lumière qui passe.
rfusca

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Si vous avez une autre lumière présente, elle peut facilement "laver" la luminescence de bas niveau. Vous ne devriez avoir AUCUNE autre lumière pour commencer.

Concentrez-vous avec une lumière allumée. Utilisez la mise au point manuelle ou, si votre appareil photo le permet, réglez sur la mise au point manuelle, basculez temporairement en AF, effectuez la mise au point, puis revenez à MF pour que l'appareil photo soit mis au point.

Éteignez ensuite les autres éclairages afin que la luciférase soit la seule source d'éclairage, exposez à partir de là et voyez ce que vous obtenez.

Si cela ne fonctionne pas, l'exposition manuelle ainsi que la mise au point manuelle vous permettent de contrôler ce que fait l'appareil photo et d'exposer à travers une gamme d'expositions probables.

J'ai juste essayé de photographier mon cadran de montre-bracelet lumineux pas particulièrement lumineux dans l'obscurité totale. À 250 mm et à environ 500 mm de distance, la montre a rempli 1/3 de la largeur d'exposition du cadre était de 6 secondes à f5,6 à 800 ISO. Les marqueurs d'heure individuels, qui ne sont pas très brillants à l'œil dans la lumière ambiante, brillent brillamment sur la photo lorsqu'ils sont la seule source de lumière.

Ainsi. Se concentrer "aurait pu être bien mieux [tm] :-)

6S, f5.6, ISO800.

entrez la description de l'image ici

Les questions clés sont - utilisez-vous un autre éclairage et que voyez-vous dans vos images.

Ces nombreuses images de luciférase suggèrent un niveau de lumière raisonnable et ne semblent pas difficiles à photographier.

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